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  • 產品名稱: PrimeScript RT reagent Kit with gDNA Erase
  • 產品貨號:RR047A
  • 產品規格:20 μl反應×100 次
  • 產品品牌:Takara
  • 供應商:
  • 產品產地: 日本 產品價格:¥詢價
  • 產品說明書:
  • 保存于運輸說明:
  • -20℃
  • 詳細信息:
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    ■ 制品內容 (20 μl反應×100次量)

    1. gDNA Eraser

    100 μl
    2. 5×gDNA Eraser Buffer*1
    200 μl
    3. PrimeScript RT Enzyme Mix I*2 100 μl
    4. 5×PrimeScript Buffer 2(for Real Time)*3 400 μl
    5. RT Primer Mix*4 400 μl
    6. RNase Free H2O 1 ml×2
    7. EASY Dilution (for Real Time PCR)*5 1 ml
     

    *1 5×gDNA Eraser Buffer在反轉錄反應前使用,請務必進行基因組DNA的除去反應。
    *2 含有RNase Inhibitor。
    *3 含有dNTP Mixture。
    *4 含有Oligo dT Primer和Random 6 mers。
    *5 制作標準曲線時梯度稀釋cDNA或RNA標準品的稀釋液。模板DNA或RNA如果用水或TE Buffer稀釋時,由于受Microtube吸附作用等的影響,往往不能準確地進行稀釋,導致實驗結果精度降低。使用本制品時,即使稀釋至低濃度也能夠進行準確地稀釋,容易在寬廣范圍內獲得準確定量的標準曲線。EASY Dilution也可以單獨購買 (Code No.: 9160)。 
    注意:EASY Dilution請與本公司Real Time PCR試劑組合使用,對于其他公司的同類制品的適用性本公司尚未進行確認。 

     
    ■ 制品說明
     

    為了準確地進行基因表達量分析,必須滿足只有cDNA作為模板檢出的先決條件,但Total RNA中常常混有基因組DNA,并可以直接作為PCR反應的模板進行擴增,因此會造成解析結果不準確。為了避免這種情況發生,通常將檢測用引物設計在內含子前后的外顯子上,使基因組DNA得不到擴增。但是,此方法不適合具有單個外顯子的基因或兩個外顯子之間所跨的內含子過小的基因,同時當基因組上有偽基因存在時、或設計引物對基因組有非特異性擴增時、以及基因信息沒被完全解析的生物種等也同樣不適合于本方法。在這種情況下,我們常常需要對Total RNA樣品進行DNase I處理,以除去殘存的基因組DNA。而DNase I處理通常要進行復雜的純化操作,同時會造成RNA的降解和損失。 
    PrimeScript RT reagent Kit with gDNA Eraser是可以除去基因組DNA進行Real Time RT-PCR反應的專用反轉錄試劑。Kit中使用了具有較強DNA分解活性的gDNA Eraser,通過42℃,2 min即可除去基因組DNA。同時由于反轉錄試劑中含有抑制DNA分解酶活性的組分,經過gDNA Eraser處理后的樣品可以直接進行15 min的反轉錄反應合成cDNA,因此,20 min內即可迅速完成從基因組DNA去除到cDNA合成的全過程。 
    使用本制品合成的cDNA適用于SYBR® Green分析法和TaqMan®探針分析法,可以根據實驗目的,選擇與SYBR® Premix Ex Taq II (Tli RNaseH Plus)、Premix Ex Taq (Probe qPCR) 等定量試劑組合使用。
    注意:Takara Bio使用SYBR® Green I 作為研究試劑已得到Molecular Probes Inc.的許可。SYBR®為 Molecular Probes Inc.的注冊商標。

     
    ■ 保存
    -20℃。
     
    ■ 試劑盒特長

    1. 含有去除基因組DNA的gDNA Eraser,只需2 min即可除去基因組DNA。
    2. 只需15 min即可高效合成Real Time PCR反應用模板cDNA,是進行2 Step Real Time RT-PCR反應的最佳試劑。
    3. 反轉錄引物使用了Random 6 mers和Oligo dT Primer混合的RT Primer Mix,可以均勻合成樣品中的各種cDNA。 
    4. 本制品提供了SYBR Green®分析法和TaqMan®探針分析法各自最適反應體系,可以根據分析方法選擇體系。? 
    (1) 反轉錄反應中RT Primer Mix的用量。 ? 
    (2) 反轉錄反應中總RNA的用量。 

     
    5. Real Time RT PCR定量需要建立標準曲線,建立標準曲線的條件就是需要將總RNA和反轉錄cDNA稀釋到較低的濃度。如果用
        水或TE Buffer稀釋時,由于模板濃度低不穩定,因而會縮小曲線范圍,結果精度降低。本制品中附加了標準曲線制作用稀釋液
        EASY Dilution (for Real Time PCR) ,將Total RNA或cDNA稀釋至低濃度時也能夠進行準確稀釋,容易在寬廣范圍內獲得準確
        定量的標準曲線。
     
    ■ 注意事項

    1. 當同時需要進行數次反應時,應先配制各種試劑的混合液 (Master Mix;其中包括RNase Free dH2O、Buffer、酶等),然后再

        分裝到每個反應管中。這樣可使所取的試劑體積更準確,減少試劑損失,避免重復分取同一試劑。同時也可以減少實驗操作或
        實驗之間產生的誤差。
    2. gDNA Eraser和PrimeScript® RT Enzyme Mix I 在使用前要小心地離心收集到反應管底部。由于酶保存液中含有50%的甘油,
        粘度高,分取時應慢慢吸取。同時,要使用精確、量程適合的移液槍,并且不要使Tip插入液面過深,否則會因Tip壁粘著造成
        損失,而使酶量不足。
    3. 5×gDNA Eraser Buffer和5×PrimeScript Buffer 2 (for Real Time) 在使用前需Vortex輕輕離心。 
    4. 分裝試劑時務必使用新的槍頭 (Tip),以防止樣品間污染。
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